新德里超级细菌金属β-内酰胺酶-1(NDM-1)ELISA检测试剂盒操作步骤:
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟。
小鼠血管紧张素转化酶(mouse ACE)
小鼠雄激素结合蛋白(mouse ABP)
小鼠促肾上腺皮质激素(mouse ACTH)
小鼠Active Caspase-3
小鼠Active Caspase-7
小鼠Active Caspase-8
小鼠激活素A(mouse Activin A)
小鼠脂联素(mouse Adiponectin)
小鼠抗线粒体抗体(mouse AMA)
小鼠抗核抗体(mouse ANA)
小鼠血管紧张素II(mouse ANG II)
小鼠血管生成素-2(mouse Angiopoietin-2)
小鼠心钠素(mouse ANP)
小鼠凋亡诱导因子(mouse AIF)
小鼠抗利尿激素/血管加压素(mouse AVP/ADH)
小鼠醛固酮(mouse ALD)
小鼠白蛋白(mouse Albumin)
小鼠血管抑素(mouse Angiostatin)
小鼠载脂蛋白E(mouse APO E)
小鼠B淋巴细胞刺激因子(mouse BAFF)
小鼠凋亡因子BAX(mouse BAX)
小鼠细胞凋亡相关基因(mouse BCL-2)
小鼠脑衍化神经营养因子(mouse BDNF)
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